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cell-free樣品
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相關(guān)文獻(xiàn)
cell-free樣品
細(xì)胞樣品 組織樣品 血液樣品 cell-free樣品 RNA提取
一、血清樣品
1、采血后，輕輕將全血滴入潔凈的EP管或者離心管；
2、4℃靜置 3~4 h，可見血塊析出；
3、5000 rpm，4℃離心 10 min，可見淡黃色血清，取出上清后可再3000 rpm，4℃離心 10 min；以最大程度保證血清質(zhì)量；
4、將血清分裝，液氮速凍，-80℃保存，干冰運(yùn)輸。
二、血漿樣品
1、用采血針和抗凝管（含 EDTA 或檸檬酸鈉）抽取全血，混勻；
2、4℃靜置 3~4 h，5000 rpm，4℃離心5 min，取上清即為血漿；
3、可將血漿分裝，液氮速凍，-80℃保存，干冰運(yùn)輸。
三、細(xì)胞上清液樣品
1、培養(yǎng)皿的細(xì)胞匯合率達(dá)到 80%~90%；
2、把原有培養(yǎng)基吸掉，加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌福芨采w細(xì)胞）進(jìn)行消化；
3、細(xì)胞變圓后加入等體積的含正常血清培養(yǎng)基終止消化；
4、用移液槍吹打細(xì)胞，使細(xì)胞懸?。?100rpm，離心5min；
5、吸掉上清液，用無 exosome 血清的培養(yǎng)基清洗細(xì)胞一次； 1100rpm，離心5min ；
6、吸掉上清液，加入無 exosome 血清的培養(yǎng)基，懸浮細(xì)胞；
7、根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中（收集上清時(shí)細(xì)胞匯合率為 60%~80%），培養(yǎng)48h~72h 后，收集細(xì)胞上清；
8、2000 rpm，離心10min，然后10000 rpm，離心30min，去除細(xì)胞或者細(xì)胞碎片，取上清；
9、分裝，液氮速凍，-80℃保存。
四、注意事項(xiàng)
1、送樣量：血清/血漿＞4ml，細(xì)胞培養(yǎng)上清液＞10ml。
2、血漿樣品不能用肝素抗凝，會(huì)影響total RNA的抽提效果。
