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RNA提取
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相關(guān)文獻(xiàn)
RNA提取
細(xì)胞樣品 組織樣品 血液樣品 cell-free樣品 RNA提取
Total RNA 抽提（ Trizol 法）
1、組織樣品，每 100mg 組織加入 1ml Trizol，用液氮研磨或采用電動(dòng)勻漿器充分打碎組織塊）。細(xì)胞則根據(jù)其生長(zhǎng)類型（貼壁、懸浮）加入相應(yīng)量的 Trizol。
2、每 1ml 用于抽提的 Trizol 加入 200μl 的氯仿，上下顛倒充分混勻 1min 左右，室溫靜置 5 min。
3、 4℃， 12,000rpm 離心 15 min。 (optional)總 RNA 的純化（ RNeasy Kit）通常在使用 Trizol 法抽提組織總 RNA時(shí)，因?yàn)榉椒ǖ南拗?，造成?RNA 的純度降低。所以建議使用 QIAGEN RNeasy Kit 進(jìn)一步的純化。
詳細(xì)操作原理和方法見(jiàn) Rneasy Mini Protocol for RNA Cleanup
1） 取總 RNA≤100μg 溶解于 100μl RNase-free 的水中，再加入 350μl Buffer RLT 并充分混勻。
2） 加入 250μl 無(wú)水乙醇， Tip 頭充分混勻。
3） 將共計(jì) 700μl 含總 RNA 的溶液轉(zhuǎn)入套在 2ml 離心管內(nèi)的 RNeasy mini 柱子內(nèi)，≥8000g 離心 15-30sec，棄去
濾過(guò)液。
4）吸取 500μl Buffer RPE 到 RNeasy mini 柱子內(nèi)，≥8000g 離心洗滌 15-30sec，棄去濾過(guò)液，再用 500μl Buffer RPE在≥8000g 離心洗滌 2min，棄去濾過(guò)液和 2ml 的套管，將 RNeasy mini 柱子轉(zhuǎn)入一新的 1.5 ml Eppendorf 管中。
5） 吸取 40 μlRNase free 的水，≥8000g 離心洗脫 1 min。
6） 重復(fù)步驟 5 一次。
7） 測(cè)定 OD 值（通常 OD 數(shù)值在 1.8-2.1 之間），并做進(jìn)一步的 RNA 質(zhì)量檢測(cè)。
Totaol RNA提取注意事項(xiàng)
1、用于 RNA 提取的試劑及其他物品必須為 RNase-free 的，并且在潔凈、 不通風(fēng)的環(huán)境中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2、客戶應(yīng)當(dāng)選用 Trizol 或 RNeasy 等自己熟悉的或公認(rèn)可以得到良好實(shí)驗(yàn)結(jié)果的提取方法進(jìn)行總 RNA 的提取。
3、可以根據(jù)實(shí)際需要選擇 RNA 的保存方法：需要長(zhǎng)期保存 RNA 保存于 75％乙醇中；無(wú)需長(zhǎng)期保存的 RNA 樣本保存于 RNase free 的雙蒸水或 Elution buffer 中。
4、建議客戶送樣時(shí)提供保存于 RNase free 的雙蒸水或 Elution buffer 中的 RNA 樣本。
5、建議客戶送樣時(shí)提供 RNA 樣本的電泳圖譜以及相關(guān) OD 值等實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
6、 RNA 樣本的保存介質(zhì)請(qǐng)務(wù)必在樣本信息登記單上加以說(shuō)明。
7、 RNA 樣本完全干燥后很難溶于水，因此不要提供干燥狀態(tài)的 RNA 樣本。
8、樣本到達(dá)本公司后，技術(shù)服務(wù)平臺(tái)將在規(guī)定的工作日內(nèi)進(jìn)行質(zhì)檢。
9、經(jīng)質(zhì)檢證明 RNA 樣本無(wú)法繼續(xù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，市場(chǎng)部將及時(shí)與客戶聯(lián)系，協(xié)商進(jìn)一步處理事宜。由于中間環(huán)節(jié)中不確定因素的存在， RNA 樣本的質(zhì)量以我公司質(zhì)檢部檢測(cè)得到的數(shù)據(jù)為準(zhǔn)！
