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相關(guān)文獻(xiàn)
細(xì)胞樣品
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一、貼壁細(xì)胞的保存
1、貼壁細(xì)胞培養(yǎng)誘導(dǎo)結(jié)束后，去除培養(yǎng)基，按照每 10cm2生長表面積加入 1ml Trizol 試劑，在旋渦震蕩器上混勻直至看不見成團(tuán)的細(xì)胞塊，使之充分溶解于 Trizol 中形成清亮不粘稠的液體。
2、放入干冰或-80℃冰箱中保存。
二、懸浮細(xì)胞的保存
1、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)誘導(dǎo)結(jié)束后，將細(xì)胞懸液以 1200r/min 離心 5min，去除上清培養(yǎng)液。
2、按照每 5×106 細(xì)胞加入 1ml Trizol 試劑，在旋渦震蕩器上混勻直至看不見成團(tuán)的細(xì)胞塊，使之充分溶解于 Trizol 中形成清亮不粘稠的液體。
3、放入干冰或-80℃冰箱中保存。
三、RNA提取
1、組織樣品，每 100mg 組織加入 1ml Trizol，用液氮研磨或采用電動(dòng)勻漿器充分打碎組織塊）。細(xì)胞則根據(jù)其生長類型（貼壁、懸浮）加入相應(yīng)量的 Trizol。
2、每 1ml 用于抽提的 Trizol 加入 200μl 的氯仿，上下顛倒充分混勻 1min 左右，室溫靜置 5 min。
3、 4℃， 12,000rpm 離心 15 min。 (optional)總 RNA 的純化（ RNeasy Kit）通常在使用 Trizol 法抽提組織總 RNA時(shí)，因?yàn)榉椒ǖ南拗?，造成?RNA 的純度降低。所以建議使用 QIAGEN RNeasy Kit 進(jìn)一步的純化。
4、取總 RNA≤100μg 溶解于 100μl RNase-free 的水中，再加入 350μl Buffer RLT 并充分混勻。
5、加入 250μl 無水乙醇， Tip 頭充分混勻。
7、吸取 500μl Buffer RPE 到 RNeasy mini 柱子內(nèi)，≥8000g 離心洗滌 15-30sec，棄去濾過液，再用 500μl Buffer RPE在≥8000g 離心洗滌 2min，棄去濾過液和 2ml 的套管，將 RNeasy mini 柱子轉(zhuǎn)入一新的 1.5 ml Eppendorf 管中。
8、吸取 40 μlRNase free 的水，≥8000g 離心洗脫 1 min。
9、重復(fù)步驟 5 一次。
10、測(cè)定 OD 值（通常 OD 數(shù)值在 1.8-2.1 之間），并做進(jìn)一步的 RNA 質(zhì)量檢測(cè)。
