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血液樣品
細胞樣品 組織樣品 血液樣品 cell-free樣品 RNA提取
鑒于血液樣本的不穩(wěn)定性，我們建議客戶在當(dāng)?shù)赜眯迈r樣本提取 RNA?？梢杂糜谘簶颖?RNA 提取的方案有Trizol 以及 QIAEN RNA Blood Mini kit 等，以上這些方法都可以提取到高質(zhì)量的總 RNA。
一、白細胞的分離
對于大量的全血樣本，需要首先分離白細胞，而后進行總 RNA 提取。
1、在已加入抗凝劑的新鮮全血中加入等體積 PBS（ 1×），充分混勻；
2、緩慢轉(zhuǎn)入另一已加入淋巴細胞分離液的離心管中，并使上述混合液處于淋巴細胞分離液液面之上（即兩種液體不要混合，保留清晰的面）， 3000 g 離心 30 min；
3、用移液槍小心分離出白細胞層；用 PBS（ 1×）清洗白細胞，離心回收白細胞，棄去上清；
4、加入白細胞 20 倍體積的 RNA Happy 或 Trizol 試劑，用一次性注射器進行反復(fù)抽打細胞直至看不見成團的細胞塊，使之充分溶解并形成清亮不粘稠的液體；
5、放入干冰或-80℃冰箱中可以保存半周左右。
注意事項
1、血液樣本保存是不穩(wěn)定的，新鮮血液必須立即分離出白細胞或者直接提取 RNA 進行保存；
2、白細胞樣本保存也是不穩(wěn)定的，未加 Trizol 試劑保存的白細胞是非常不穩(wěn)定的，白細胞樣本務(wù)必按照上述過程進行保存；
3、請在-80℃冰箱中保存 RNA 或者白細胞樣本；
4、血液樣品經(jīng)凍融即發(fā)生溶血，不能用于 RNA 的抽提。
二、單個核細胞的分離
對于大量的全血樣本，如實驗需要，可以首先分離單個核細胞，而后進行總 RNA 提取。
1、在離心管中加入 3-4ml Ficoll，再緩慢沿管壁滴加全血 5ml 左右（切忌破壞界面）。
2、室溫水平離心， 2000rpm， 15 分鐘。
3、用 Tip 頭小心吸取中間一層薄的呈云霧狀的單個核細胞。
4、用 PBS 或 HANKS 液或生理鹽水或 1640 培養(yǎng)液洗滌單個核細胞溶液。
5、室溫 1000rpm 離心洗滌 10min。
6、棄上清，再重復(fù)步驟 5 一次，合并各管。
7、 Trizol 試劑溶裂解細胞，保存于-80℃冰箱中待抽提 RNA。
